Spectroscopie (UV, IR, masse)

Spectroscopie

Spectroscopie UV-visible

• Absorption de photons UV-vis → transitions électroniques (n→pi*, pi→pi*).
• Loi de Beer-Lambert : A = epsilon × l × C. A = absorbance, epsilon = coefficient d'absorption molaire (L.mol⁻¹.cm⁻¹), l = trajet optique, C = concentration.
• Lambda max : longueur d'onde du maximum d'absorption. Chromophores : C=C, C=O, cycles aromatiques.
• Applications : dosage (protéines à 280 nm — Trp, Tyr ; ADN à 260 nm), cinétique enzymatique (NADH à 340 nm).

Spectroscopie infrarouge (IR)

• Absorption IR → vibrations moléculaires (élongation, déformation).
• Bandes caractéristiques : O-H (~3300 cm⁻¹ large), N-H (~3400 cm⁻¹), C=O (~1700 cm⁻¹), C-H (~2900 cm⁻¹).
• Empreinte digitale : zone 600-1500 cm⁻¹, spécifique de chaque molécule.

Spectrométrie de masse

• Principe : ionisation → séparation selon le rapport m/z (masse/charge) → détection.
• Ionisation : ESI (électrospray, molécules biologiques), MALDI (protéomique).
• Pic moléculaire [M+H]⁺ → masse molaire. Fragmentation → structure.
• Applications : protéomique, pharmacologie, dépistage néonatal, toxicologie.