Techniques de séparation

Centrifugation

Force centrifuge relative (g) = omega² × r / g. Accélère la sédimentation.
Centrifugation différentielle : vitesses croissantes → sépare noyaux (600g), mitochondries (10 000g), microsomes/RE (100 000g), ribosomes (300 000g).
Ultracentrifugation en gradient de densité : saccharose (vitesse de sédimentation, coefficient S en Svedberg) ou CsCl (densité d'équilibre). Ribosome 70S (procaryote) = 50S + 30S, 80S (eucaryote) = 60S + 40S.

Électrophorèse

Migration de molécules chargées dans un champ électrique. Vitesse = charge × E / friction.
Gel d'agarose : ADN (taille, charge proportionnelle → séparation par taille). Coloration BET ou SYBR. Marqueur de taille.
SDS-PAGE : protéines (séparation par masse). Isoélectrofocalisation : séparation par pHi.
Électrophorèse capillaire : haute résolution, petits volumes. Diagnostic : hémoglobinopathies.

Chromatographie

Séparation basée sur la distribution entre une phase mobile et une phase stationnaire. Types : exclusion de taille, échange d'ions, affinité, phase inverse (HPLC). Paramètres : temps de rétention, résolution, facteur de capacité.

Dialyse et ultrafiltration

Dialyse : membrane semi-perméable, passage des petites molécules par diffusion (dessalage, changement de tampon). Ultrafiltration : membrane sous pression → retient les macromolécules (concentration). Hémodialyse (rein artificiel) : élimine urée, créatinine, K⁺ excédentaire du sang.

Point clé concours : Les unités Svedberg ne sont pas additives car elles dépendent de la forme ET de la masse (50S + 30S = 70S, pas 80S). L'électrophorèse des protéines sériques est un examen de routine : pic monoclonal en gamma → suspicion de myélome → immunofixation pour typer.