Techniques de biologie cellulaire

Microscopie

Optique : résolution ~200 nm (limite de diffraction). Coloration HE (hématoxyline = noyaux bleu, éosine = cytoplasme rose). Fond clair, contraste de phase (cellules vivantes), fluorescence.
Confocale : laser + pinhole → sections optiques fines, reconstruction 3D. Fluorescence.
Électronique à transmission (MET) : résolution ~0.2 nm. Coupes ultrafines, coloration métaux lourds. Ultrastructure (organites, virus).
Électronique à balayage (MEB) : surface 3D. Topographie cellulaire.

Cytométrie en flux (FACS)

Cellules en suspension passent une par une devant un laser. Mesure de la fluorescence (anticorps couplés à des fluorochromes) et de la diffusion lumineuse (taille, granularité). Permet le phénotypage (CD4, CD8, CD19), le tri cellulaire, l'analyse du cycle cellulaire (contenu en ADN), la détection d'apoptose (annexine V).

Culture cellulaire

Culture primaire : directement du tissu. Durée de vie limitée (limite de Hayflick ~50 divisions).
Lignées immortalisées : transformation spontanée ou induite (SV40, HPV E6/E7). Prolifèrent indéfiniment. HeLa (1re lignée humaine, carcinome du col, 1951).
Conditions : milieu (DMEM, RPMI), sérum (SVF 10%), 37°C, 5% CO2, stérilité.

PCR et biologie moléculaire

PCR : dénaturation (95°C) → hybridation amorces → élongation (Taq polymérase, 72°C). 2^n copies en n cycles. RT-qPCR : quantification de l'ARNm (rétrotranscription + PCR temps réel). CRISPR-Cas9 : édition génomique ciblée (guide RNA + Cas9 nucléase → coupure double brin → réparation/insertion).

Point clé concours : L'immunofluorescence utilise des anticorps couplés à des fluorochromes pour localiser des protéines in situ. La GFP (Green Fluorescent Protein) permet de suivre des protéines en temps réel dans les cellules vivantes. Le Southern blot = ADN, le Northern blot = ARN, le Western blot = protéines.